乔晋琳1王健瑞2路平1马广昊1林楠1顾群1刘凤桐3陈蕾3

[摘要]目的 以腰三横突综合征动物实验模型为对象，通过针刀干预对兔血浆中血栓素B2(TXB2)、6—酮—前列腺素(PGF1α)、5—羟色胺（5—HT）、血小板计数(PLT)等的影响，探讨针刀的修复作用及临床意义。方法 将实验兔24只随机分为针刀治疗组、封闭对照组、模型对照组、正常对照组（n=6），于造模后10d、15d、25d、30d检测结果，进行统计学分析；并于30d进行组织形态学观察。结果 针刀组10d、15d、25d、30d测TXB2与模型组比较差异无显著性（p>0.05），测PGF1α、TXB2/PGF1α比值、5—HT与模型组相比差异有非常显著性（p<0.01）；组织形态学观察，针刀组的成纤维细胞排列成行，毛细血管增生扩张，原始瘢痕组织形成，组织修复能力强。结论 针刀干预对腰三横突综合征动物模型具有良好修复作用，为临床治疗提供了实验依据。

主题词：针刀;  第三腰椎横突综合征 ;  动物实验 ;  修复

Experimental study of the clinical rehabilitating effect of acupotomology  on the third lumber vertebrae transverse foramen syndrome of animal test model in rabbits Qiaojinglin Luping.etc.(NAVY hospital Beijing，Beijing 100037) Wangjianrui,Liufengtong,etc.(Beijing University of TraditionalChinaese Medicine,Beijing100029)

[Abstract]  Objective Regard the model of The third lumbar processus transverses vertebrarum syndrome as objection, probe the effect of acicula and clinical meaning through the TXB2 and 5-HT、6-keto-PGF1α       observation on the 10d、15d、25d、30d after operation. Methods 24 rabbits were divided into 4 groups : acupotomology groups、blockade groups、and model groups、normal groups (n=6). To measure the result on the the 10d,15d,25d,30d after the model was come into existence, it was carried out statistical analysis. Pathological observation on the 30 days after operation ,ET-1and 5-HT、6-keto-PGI21аRIA observation on the 10d、15d、25d,30d after operation. Results As compared with the model group, the result of TXB2 has not significant difference on the 10d、15d、25d,30d(p>0.05) ,the significant difference in the M group of PGF1α、TXB2/PGF1α、5—HT(p<0.01). The results of acupotomology groups is better as compared to the blockade groups and acupuncture groups as evident, there was significant difference in the group according rating scale (P<0.001). Pathological observation suggests that the fibroblast arrange in order, capillary vessel hyperplasia dilatation, originality scar organize come into being. Organize rehabilitate ability is stronger. There is significant difference among three groups (P<0.001). Conclusions: The method of the acupotomology could rehabilitate effect on the animal model of the third lumbar processus transverses vertebrarum syndrome as evident and it could provide experimental gist on clinical treatment.
[Key words]：Acupotomology  ； The third lumbar processus transverses vertebrarum syndrome ； animal experiment ； rehabilitates

  0引言 临床运用针刀疗法治疗第三腰椎横突综合征已取得了一些可靠疗效[1][2]但其治疗机理众说纷纭，针刀对软组织的修复机制尚无文献报告。为了进一步探讨针刀对腰三横突综合征这一软组织损害的治疗机理，我们以腰三横突综合征动物实验模型为对象[3] ,通过针刀干预，观察动物血浆中6—酮—前列腺素（PGF1α）、5—羟色胺（5—HT）、血栓素B2（TXB2）及血小板计数（PLT）的含量变化，以及组织形态学改变，推测针刀干预对软组织修复的可能机制，为临床治疗提供实验依据。

1材料与方法

1.1实验动物

健康雄性日本大耳白纯种兔24只，一级，体重2～2.5㎏，由北京富华实验动物养殖场提供，中国中医研究院基础所实验动物中心一级动物室喂养。

1.2主要药物与试剂

1.2.1  明胶，南京制药三厂。

1.2.2  6—keto—PGF1α（PGF1α）放免药盒，由解放军总医院科技开发中心提供，海军总医院海科锐放免中心测定。

1.2.3  血栓素B2放免药盒，由解放军总医院科技开发中心提供，海军总医院海科锐放免中心测定。

1.2.4  5—HT由中日友好医院临床研究所生理室测定。

1.2.5 全血指标由海军总医院检验科测定。

1.3 主要仪器

显微外科手术器械、DS2—1手术放大镜（6×），光学显微镜。

1.4 实验兔腰三横突综合征模型制备

     选用健康、雄性日本大耳白纯种兔24只，体重2～2.5㎏，采用王健瑞[2]第三腰椎横突综合征动物模型制作兔模型18只，以10%速眠宁（25ng/㎏）肌注麻醉兔，无菌条件下取兔腰脊部纵切口3cm，向两侧剥离骶棘肌，显露L3~L4棘突，完整分离腰脊深筋膜脊神经后支穿出部分。将0.5×0.5cm大小明胶海绵植入L3横突后半段深筋膜下，保留完整肌筋膜，彻底止血，用0号线等距离缝合动物骶棘肌筋膜及皮肤，切口用庆大霉素冲冼，伤口用免贴妥喷雾。麻醉苏醒后与另外6只正常兔在同一饲养条件下饲养。

1.5  分组及检测方法

1.5.1        分组：将实验兔随机分为：模型对照组（n=6）：无治疗干预；针刀治疗组（n=6）：针刀治疗干预；封闭对照组（n=6）：封闭治疗干预；选择正常兔作正常对照组（n=6）；共分4组。于模型制备第10d、15d、20d、30d进行各项观察和指标检测。

1.5.2        检测方法:(1)针刀治疗干预：针刀治疗组饲养14d时，在无菌条件下用Ⅰ型4号针刀于实验兔腰三横突后半段表皮投影处刺入至深筋膜下，行疏通切割2~3刀，出针，按压针孔止血。(2)封闭治疗干预：封闭治疗组饲养14d时，在无菌条件下，用5号注射针刺入腰三横后半段深筋膜下，注入8g/L利多卡因1ml+醋酸地塞米松1mg+维生素B1250µg，出针，按压止血。(3)取血：于第10d、15d、25d、30d均采用耳缘背侧静脉穿刺采血。(4)取材：于30d行气栓法处死动物。立即取腰三椎体及横突周围组织用福尔马林固定，并取新鲜组织作牛血清细菌培养成。(5)检测指标测定: ①PGF1α测定：静脉穿刺取血3ml，即刻与消炎痛—EDTA.Na2液0.2ml在一次性5ml空针管内混匀，注入试管内，4℃离心3500rpm，15min，分离血浆，－20℃保存，取上清液按放免法测定。②TXB2测定：：静脉穿刺取血3ml，即刻与消炎痛—EDTA.Na2液0.2ml在一次性5ml空针管内混匀，注入试管内，4℃离心3500rpm，15min，分离血浆，－20℃保存，取上清液按放免法测定。③5—HT测定：静脉穿刺取血3ml，即刻与低分子肝素在一次性5ml空针内颠倒混匀，注入试管内，4℃离心3500rpm，15min，分离血浆，－20℃保存。④PLT测定：静脉穿刺取血1ml，即刻与低分子肝素1ml在一次性5ml干燥管内混匀，4℃保存，尽快测PLT含量。(6)光镜观察: 取所有兔的椎体节段及横突周围组织，4%福尔马林固定，5%硫酸脱钙，酒精逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，HE染色，切片固定，在Olgmpus光镜下观察肌肉、肌腱及炎性病理改变，并与正常组对照。

1.6 统计学分析

采用SPSS10.0软件包，各组数据均以平均值标准差( x±s)表示，组间比较用t检验。P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有非常显著性。

2 结 果

2.1 血浆TXB2和PGF1α的变化（表1、2）

表1     兔不同时期血浆TXB2和PGF1α的含量变化（n=6, µg/ml, X±s）

10d                      15d                            25d                      30d

Group            TXB2      PGF1α      TXB2    PGF1α        TXB2   PGF1α         TXB2    PGF1α

Acupotomology groups 590.3±23  583±31   684.7±20a  765±16j   651.5±18c 427±34l    616±12e   256±38n

Blockade groups        692.5±18   731±26   710.5±32b  791±25k  690.5±23d 461±17m    539±21   354±17o

Model groups      646.4±16    536±17   769±19g    342±15h  732±24  259±22     620.6±23  962±30i

Normal groups     601.5±20    860±21   672±13     517±28   659±17  440±14    669.5±28  251±27

Note：Compare to Normal group：: P>0.05,ta=2.13,tb=2.28,tc=2.43,td=2.32,te=2.41,tf=2.43

P<0.01,tj=3.84,tk=3.95,tl=3.71,tn=4.17,to=4.02.

Compare to Normal group:：P<0.05, tg=2.46；P<0.01, th=3.87, ti=4.16

从上表看出15d时，针刀及封闭组PGF1α升高，与模型组相比差异有非常显著性（P<0.01）；模型对照组TXB2升高，与正常组差异有显著性（P<0.05），模型对照组PGF1α降低，与正常组差异有非常显著性（P<0.01）。30d时，针刀及封闭组PGF1α降低，与模型组差异有非常显著性（P<0.01）；模型组PGF1α升高，与正常组差异有非常显著性（P<0.01）。

表2    兔不同时期血浆TXB2/PGF1α比值变化（n=6,  x±s）

Group            10d            15d            25d            30d

Acupotomology groups 1.01±0.74       0.9±1.25    1.53±0.53 ch     2.41±0.32fj

Blockade groups     0.95±0.69      0.89±1.28b     1.50±1.35di      1.52±1.24gk

Model groups      1.21±0.84       2.25±1.27e      2.83 ±1.09     0.70 ±0.77

Normal groups     0.70±0.95       1.30 ±0.46      1.50 ± 2.0      2.67 ±1.04

Note：Compare to model groups：P<0.01, ta=3.91,t b =3.87,  tc=3.78, td=3.79， tf=3.98, tg=3.76.

Compare to Normal groups：P<0.01,te=3.74;  P>0.05,  th=2.31, ti=2.01,  tj=2.17;  P<0.05, tk=2.56.

由上表可看出：15d时针刀及封闭组TXB2/PGF1α与模型组相比差异非常显著（P<0.01）；而模型组TXB2/PGF1α较正常组差异也有非常显著性（P<0.01）；25d时模型对照组TXB2/PGF1α值较针刀及封闭组升高（P<0.01），30时却反降低，较上述两组差异有非常显著性（P<0.01）。

2.2 血浆PLT、5—HT的变化（表3）

表3  兔不同时期血浆PLT(10^g/l)、5—HT(ng/ml) 含量变化（n=6, x±s）

10d           15d             25d               30d

Group        PLT   5—HT   PLT    5—HT   PLT    5—HT   PLT   5—HT

Acupotomology groups 413±33a  410±22 c  330±32e 928±42gp   220±21i  780±23j r  342±17 l  374±40nt

Blockade groups   332±28b 217±25d  288±13f  196±23 hg   87±6   334±26 ks    210±31m 234±16or

Model groups     234±14  233±22  91±25   135±37   120±14  111±23    140±23   90±23

Normal groups    139±12   123±32  134±34  143±14   143±13  143±21    121±18   138±27

Note: Compare to Normal group: P<0.01,ta=3.97, tb=3.85, tc=3.95, td=3.78,te=3.81, tf=3.76,  tg=4.11,

th=3.71,  ti=3.73,  tj=3.96,  tk=3.82,  tl=3.84,  tm=3.78,  tn=3.92,  to=3.75.

Compare to Model group；P<0.01, tp=4.14, tr=3.98, tv=3.73, ts=3.81, tt=3.78;  P<0.05, tq=2.46。

由上表看针刀及封闭组PLT、5—HT含量均高于正常组，差别非常显著；上述两组于15d、25d、30d的含量也均高于模型组，差别非常显著或显著（P<0.01,P<0.05）。

2.3 组织形态学观察

于30d进行组织病理切片观察各组病理改变如下：1、针刀治疗组：成纤维细胞排列成行，肌腱筋膜内细胞集聚，毛细血管增生扩张，胶原重建开始，原始瘢痕形成。2、封闭对照组：成纤维细胞增多，红细胞明显减少，毛细血管增生较针刀组少。3、模型对照组：成纤维细胞开始增多，纤维有断裂，可见红细胞散在，有增生的毛细血管。4、正常对照组：结缔组织纤维有序排列，无炎症浸润。

3 讨 论

3.1  TXB2及PGF1α均为花生四烯酸的代谢产物，TXA2主要在血小板合成，PGF1α主要在血管内皮细胞内合成。但二者半衰期极短，很快代谢为血栓素B2（TXB2）和6—酮—前列腺素（PGF1α）。因此，通常测定TXB2和PGF1α来了解前两种活性物质水平。早在1976年Boot等[4]报道，TXB2能引起急性炎症反应，使中性粒细胞向炎症部位移动，且与剂量呈正相关。Brune[5]报道巨噬细胞在释放PGF1α的同时也可产生TXB2。TXB2具有强烈的收缩血管和促进血小板聚集作用，并能介导细胞及溶酶体膜的破坏[6]。PGF1α具有强烈舒张血管，抑制血小板聚集及稳定细胞膜的作用[7]。正常情况下，TXB2及PGF1α在体内处于动态平衡状态，以维持血管张力和血小板的稳定，其两者的比值在一定程度上反映对血管舒缩状态和微循环状态的影响。如两者浓度升高，平衡失调，则将导致组织损伤引起病理介导作用。

3.2 本实验研究表明：由于针刀和封闭治疗干预，15d时针刀及封闭组PGF1α值上升，表明局部微血管扩张，组织供氧量增多，炎性吸收增强。而模型组由于未加干预，TXB2升高，PGF1α浓度降低，表明局部微血管收缩，血小板聚集，组织缺氧，微循环障碍而出现瘀血表现。30d时针刀及封闭组PGF1α值趋正常，而模型组反升高（P<0.01），表明模型组组织修复慢。因此，针刀、封闭干预似可将组织修复过程提前，从30d组织形态学观察，也可证实这一点。

3.3  尽管软组织修复的作用机制尚未明了，但从血浆TXB2/PGF1α比值关系上，能反映出一些问题。从表2看出，25d时针刀及封闭组TXB2/PGF1α比值与正常组差异不显著（P>0.05），表明治疗干预后TXB2/PGF1α呈良性表现，相对平衡。而模型组于15d、25d时比值偏高，表明局灶微循环障碍，组织缺血缺氧严重，修复缓慢。30d时封闭组比值与正常组相比差异不显著（P<0.05），表明本组修复情况不理想，平衡关系差，这也可能是临床上封闭组疗效低于针刀组的原因之一。黄跃生等[8]认为在严重烧伤早期，TXB2/PGF1α失衡可能是烧伤早期血液流变学变化的因素之一。从软组织损伤急性期转为慢性期的修复过程来看，本实验证实TXB2/PGF1α失衡与PLT（表3）呈正相关。因此，可推测TXB2/PGF1α失衡可能也是软组织损伤修复期血液流变学变化的因素之一。其可能机理是：（1）使血管收缩，致血流阻力增大，血流减慢和粘滞性增高；（2）作用于血小板表面的特异性受体[9]，使胞浆Ca+2增高，致血小板变形，聚集和释放反应，（3）PGF1α能抑制血小板聚集和释放反应，并可解聚血小板聚集物和降低血管阻力[10]。因此,PGF1α相对不足，也可发生血流变学紊乱。

3.4  非神经源性炎症介质与神经肽类在炎症疼痛调制过程中起着重要而复杂的作用。炎症组织释放的内源性化学物质包括缓激肽、5—HT、组胺、白三烯等，均具有刺激炎性反应和致痛作用。这些物质可兴奋和机械刺激敏感C或A型伤害传入纤维。我们的研究结果显示：针刀组与封闭组在不同时期的5—HT含量均较正常对照组高（P<0.01），特别是针刀组于干预后5—HT含量显著增高，至30d时逐渐回落。上述结果反映出：（1）由创伤介导的无菌性炎症模型是一种局部的持续性反应，它可延续很长时间，这符合慢性软组织损伤修复的发病过程。（2）针刀治疗干预后，血管通透性及炎症渗出增强，促进了软组织的修复作用，从临床治疗效果也证明了此点的重要性。（3）针刀干预后短时期内5—HT含量增高，这在临床上表现为针刀术后2~3d疼痛反而加重，提示我们在针刀治疗时可辅助用一些局麻镇痛药，以减轻炎性反应的副作用。

3.5  要深入探讨针刀干预对第三腰椎横突综合征动物模型的修复作用还需要进行艰苦工作。但从本实验来看，可以推导出如下可能机制：（1）去松止痛：由于本病动物实验模型致炎范围在腰三横突后半段深筋膜下，因此本病病灶应为筋膜结缔组织的无菌性炎症[3]。由于筋膜处炎症渗出，结缔组织增生，使局部张力增强，内应力增加，局部缺血缺氧严重，TXB2/PGF1α失衡，故用针刀切割部分筋膜可起到减张减压，改善微循环，缓解疼痛的作用。（2）活血化瘀：模型制作14d时针刀干预，15d时测PGF1α含量升高，且TXB2/PGF1α比值较模型对照组差异非常显著，表明毛细血管扩张，炎症反应增强，组织代谢加快，因此在25d、30d时TXB2/PGF1α比值趋于平衡；针刀组的组织形态学改变也支持此点。（3）促进软组织损伤病灶修复：纤维结缔组织如肌腱、韧带、筋膜、关节囊、腱鞘及骨膜等具有强大修复能力，最终形成瘢痕组织。针刀干预可将这种修复作用提前，缩短病程，形成新生结缔组织，并且可防止修复过度而形成组织粘连甚至挛缩。（4）由于针刀器械也具有针灸针的刺激作用，所以推测针刀亦能刺激内源性脑啡呔释放，提高机体耐受力，缓解疼痛[11]。

总之，通过实验观察，针刀对腰三横突综合征动物模型的修复作用是肯定的，差异非常显著。至于在此修复过程中是否有免疫因素的参与，需作进一步研究。

4 参考文献

[1]Qiao Jin-lin,Gu Quen, Lin Nan . Application Of Acupotomology On Therapy In The Third Lumbar Processus Transverses Vertebrarum Syndrome . Zhongguo KangfuYixue  (Chinese Journal Of Rehabilitation Medicine.)  2002.17(5):293-294

[2]Li JB. Therapy of the third lumbar transverse process syndrome by Acupotomology Looseness.hongguo Linchuang Kangfu (Clin J Clin Rehabil)2002,6(18):878-9.

[3] Wangjianrui ,Qiaojinglin,Liufengtong.Establishment and experimental study of the third lumber vertebrae transverse foramen syndrome of animal test model in rats、rabbits. (Chinese Journal Of Physical Medicine Rehabilitation.) 2003.25 (6):

[4] Boot JR,Dawson w,Ann Kitchen E.The chemotactic activity of thromboxane B2:a possible role of inflammation (abstract)[J].J physiology,1976,257:47—48

[5] Brane K,Glatl M,Kalin K,et al.pharmacological control of prostaglandin and thromboxane release from macrophanges[J].Nature .274(5668):261—263.

[6] Hamberg M,Srensson J,Samuelsson B.Thromboxanesia new group of biologicang active compounds derived from prostaglandin endoperoxides[J].Proc Nat Acad Sci U.S.A,1975,72:2994.

[7] Moncada S,Gryglewski R,Bunting S,et al.An eniyme isolated from ateries transfroms prostaglandin endoperoxides to an unstable substance that in habits platelet aggregation[J]. Nature,1976,263:663.

[8] Huang yuesheng,Yang zong chen,Li ao.The effect on the unbalance of the plasma TXB2 and PGF1α in early damage of the burn [J]. Chinese Journal Of Medicine.1993，73（10）：615—617.

[9] HuangYS,LiA,Yang ZC,Effects of smoke inhalation injury on thromboxane levels and platelet counts[J] .Burns 1988,14:440.

[10] Huang yuesheng, Li ao, Yang zong Chen. The effect of the plasma TXB2 and PGF1α in shock and bowel damage [J]. Foreign Medical Sciences. Fascicule of trauma and surgery basis problem, 1989 10:9.

[11]Yan XM. Clinical Pain Iatrology[M]. Yanbian: Yanbian People Press,1996,306

作者单位：1000371 中国人民解放军海军总医院理疗科（乔晋琳、顾群、马广昊、林楠、路平）2北京中医药大学中药学院中药实验室，100029（王健瑞），3北京中医药大学东直门医院外科，100700（刘凤桐、陈蕾）

作者简介：姓名：乔晋琳 性别：男。1963年生山西省太原市人。汉族。1986年贵阳中医学院中医系毕业，学士学位。 副主任医师、副教授 职称 主任 职务，主要从事针灸学、软组织外科疾病的诊治研究，发表论文23篇 ，主编《Hang Acupuncture Therapy 》等3部论著。

Author Brief:  Name: Jinlin Qiao   Sex:  Male   He was born on Taiyuan city Shanxi Province in 1963. Folk: The Han nationality  He studied in the traditional medicine institute of Guiyang in 1986 , graduated and achieved bachelor degree. The title of a technical post : Deputy director physician, associate professor. Duty: Director  He is mainly engaging in acupuncture and treating parenchyma surgery diseases.

Published thesis:twenty three thesises. He have edited three works,for example, 《Hang Acupuncture Therapy 》.